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    重組腸激酶
    日期:2021-11-11    瀏覽次數:次

    重組腸激酶


    - 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          腸激酶(Enterokinase, EK)是一種高度專(zhuān)一性識別 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 序列的蛋白酶,在 Lys 的 C 端水解多肽。具有高度專(zhuān)一性,水解效率高的特點(diǎn)??稍谳^寬的 pH 范圍(4.5~9.5)和較寬溫度范圍內有效切割 融合蛋白??沙ノ挥诘鞍踪|(zhì) N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽。 冀百康重組腸激酶采用重組畢赤酵母高效分泌表達技術(shù),經(jīng)多級層析純化,制成的高純度、高活.性重組牛 腸激酶,不含其他蛋白酶。


       - 產(chǎn)品優(yōu)勢

    ? 無(wú)動(dòng)物源性:無(wú)動(dòng)物病.毒、無(wú)致病物質(zhì)、無(wú)外源因子污染,安.全性高。 

    純度高,比活高。 

    生產(chǎn)規模 1000L 以上。 

    合規性:生產(chǎn)設備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規要求,符合 GMP 指導原則。 

    質(zhì)量文件完整:按客戶(hù)需求,可提供相關(guān)法規支持文件。



    - 產(chǎn)品特性


    性狀

    淡黃.色、無(wú)色澄明液體

    酶活.性

    ≥5.0U/μl

    ph值

    7.0-9.0

    純度 單一主條帶
    電泳 25.8±2.6 kDa
    宿主蛋白殘留
    ≤100ng/mg pro.
    外源性 DNA 殘留 ≤100ng/mg pro.

    酶活定義:在 25℃,12~16 小時(shí)內,將 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCI pH 8.0 

    緩沖液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量為 1U。



    - 使用方法

    【25℃酶切條件為】25mM Tris-HCl PH8.0 體系中融合蛋白 0.1-1mg/ml(蛋白總量 50-100μg),重組 EK 0.1~0.2U,酶切 16~24 小時(shí),用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。 

    【4℃酶切條件為】可在 4℃對底物進(jìn)行有效低溫酶切,但需要將酶切時(shí)間延長(cháng)至 48~64 小時(shí),或增加 2-3 倍酶量。低溫酶切有時(shí)候可獲得比 25℃更好的酶切效果。 ? 在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影響??蓞⒄找韵峦扑]方法進(jìn)行酶切: 1) 為獲得理想酶切結果,請將樣品透析到 25mM Tris-HCl pH 8.0 緩沖液中,再進(jìn)行酶切; 2) 若不便透析,可將樣品稀釋?zhuān)溥蚝吭?100mM 以下,NaCl 濃度在 50mM 以下,甘油濃度小于 5%以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即 1U 酶切 500μg 蛋白); 3) 如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,且不便去除,此時(shí)適當增加酶量或延長(cháng)酶切時(shí)間,也可 達到較好酶切效果。 

    可對酶切條件進(jìn)行優(yōu)化,例如緩沖液 pH,融合蛋白濃度,EK 的量,以及酶切時(shí)間,融合蛋白能在穩定條 件下被酶切,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。 

    去除重組腸激酶的辦法:可使用胰蛋白酶抑.制.劑親和層析去除重組腸激酶。 注意:不建議 37℃條件下酶切,可能會(huì )有非特異性酶切出現。



    - 運輸及穩定性

    運輸穩定性:冰袋運輸,活.性穩定。

    儲存穩定性:-15℃及以下,24 個(gè)月穩定,25℃,一周內無(wú)活.性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,
    250mM NaCl,2mMCa2+,50%甘油。

    凍融穩定性:反復凍融 5 次,無(wú)活.性損失。

    本品僅供研究使用,不得用于動(dòng)物或人類(lèi)的診斷或治遼。


    說(shuō)明:由于廣告法的緣故,部分違禁詞用同音字替換或使用符號來(lái)間隔,如有疑問(wèn)可以聯(lián)系我們提供詳細的產(chǎn)品信息。


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